RAMOS FERNANDEZ ANTERO

CARACTERIZACIÓN MOLECULAR DE LOS HONGOS FORMADORES DE ECTOMICORRIZAS ASOCIADOS CON Abies religiosa (H.B.K.) Schl. et Cham.

Antero Ramos-Fernández, Instituto de Biotecnología y Ecología Aplicada. Circuito Los Lagos, Zona Universitaria. Tel. (+52) 228 842 2773. Apdo. Postal 250, CP. 91090, Xalapa, Veracruz. Correo-e. antramos@uv.mx.

COMITÉ TUTORIAL

Dr. Juan Carlos Noa Carrazana

Dr. Miguel Ángel Jiménez Montaño

Dra. Norma Flores Estévez

Dra. María del Rosario Pineda López

Dr. Lázaro Rafael Sánchez Velásquez

 

 

RESUMEN

La ectomicorriza (EM) se caracteriza por una interacción entre las hifas de al menos una especie de hongo y las raíces secundarias (diámetro < 2mm) de una o más plantas, cuyas hifas penetran la raíz, pero no se introduce en la célula. Abies religiosa (H.B.K.) Schl. et Cham. (abeto, pinabete, oyamel), es una Pinaceae que se encuentra distribuida en la República Mexicana en las montañas de diez estados, entre ellos Veracruz. Los estudios de comunidades de los hongos formadores de ectomicorriza (HEM) se enfrentan a la dificultad técnica de diferenciar y separar los micelios de otros hongos. La estructura de la comunidad de HEM puede ser investigada por amplificación y análisis del material genético (ADN). Las técnicas moleculares como la amplificación por PCR del ADN ribosomal (ADNr), análisis de regiones hipervariables (ITS), entre otras, han permitido identificar hongos HEM asociados con otras especies arbóreas. El desarrollo de las herramientas bioinformáticas han permitido un correcto análisis e identificación de los HEM, determinando la distancia algorítmica entre secuencias de ADN, que nos permitirán crear árboles filogenéticos y a su vez una aproximación al conocimiento de la composición y estructura de las comunidades de HEM asociadas con Abies religiosa. De la Colección de Referencia del Laboratorio de Organismos Simbióticos del INBIOTECA, hasta el momento solo se han identificado por sus morfotipos ectomicorrícicos 13 de ellos. El objetivo general de este trabajo es conocer mejor la estructura de la comunidad de HEM del bosque de oyamel del Cofre de Perote, Veracruz. Resultados preliminares del presente fueron la colecta de 281 muestras de carpóforos a lo largo del gradiente altitudinal del bosque de oyamel en el Cofre de Perote, Veracruz, encontrando 30 géneros de HEM: Agaricus, Aleuria, Amanita, Boletus, Calocera, Calocybe, Catathelasma, Clavaria, Clavulina, Clytocybe, Collybia, Copelandia, Coprinus, Cortinarius, Cystoderma, Ganoderma, Geastrum, Gomphus, Gymnopilus, Hebeloma, Helvella, Humaria, Hygrocybe, Inocybe, Laccaria, Lactarius, Lepiota, Lycoperdon, Marasmius, Melanoleuca, Morchella, Mycena, Omphalina, Otidea, Panaeolus, Peziza, Phellodon, Pholiota, Psilocybe, Ramaria, Russula, Tricholoma, Vascellum; 4 géneros en discusión para clasificarse como HEM: Coprinus, Geastrum, Melanoleuca, Morchella; y 10 géneros considerados como saprófitos: Agaricus, Copelandia, Ganoderma, Marasmius, Mycena, Omphalina, Otidea, Panaeolus, Psilocybe, Vascellum. Se  logró la extracción de ADN con el protocolo de Doyle y Doyle (descrito en el año de 1987) modificado, de ectomicorriza y tejidos de carpóforos. El ADN extraído del tejido de carpóforo fue utilizado para la amplificación de la región ITS por PCR, obteniendo fragmentos de alrededor de 700 pb con los iniciadores ITS (ITS1/F, ITS4/R). Este fragmento tiene el tamaño esperado para el género Amanita. Los productos de PCR se clonaron en el plásmido  pJET1.2/Blunt e introducidos en células E. coli cepa JM107. El escrutinio de bacterias transformantes fue comprobado por digestión enzimática usando la enzima BglII. Hasta el momento los fragmentos clonados están siendo secuenciados. Los resultados de las secuencias específicas de hongos HEM nos permitirán el diagnóstico molecular de los mismos.